スピンカラムによるRNA抽出方法

その他

スピンカラムはチューブの中にシリカメンブレン(核酸を吸着する物質)が入っています。

ここに溶液を入れて遠心分離すると 、溶液はシリカメンブレンを通って コレクションチューブに落ちていきます。

そのとき、シリカメンブレンに核酸が吸着されます。

①抽出液に結合バッファーを入れてRNAを析出させます。

②その溶液をスピンカラムに入れて遠心分離機にかけ、シリカメンブレンにRNAを吸着させます。

 コレクションチューブに落ちてきた水は捨てます。

③洗浄バッファーをスピンカラムに入れて再度遠心分離機にかけます。

 シリカメンブレンにはRNA以外のものも吸着されているので、それを落とすために行います。

④DNA分解酵素をスピンカラムに入れ、放置します。

 こうすることでRNAだけをシリカメンブレンに留めておくことができます。

⑤洗浄バッファーをスピンカラムに入れて遠心分離機にかけます。

⑥ここでコレクションチューブを新しいチューブに付け替え、RNA分解酵素が除去された水(RNaseフリー水)をスピンカラムに入れて、放置します。

RNAは水に溶出するので、RNaseフリー水と一緒にRNAがチューブに落ちてきます。

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